TonkBio cDNA 第一链合成试剂盒

英文名称：TonkBio First Chain cDNA Synthesis Kit

产品描述：TonkBio cDNA 第一链合成试剂盒是专门用于两步法RT-PCR的第一步，含有合成高质量第一链cDNA所需的所有成分，适用于后续的PCR、qPCR以及基因克隆。采用的是无RNase H活性的M-MLV逆转录酶，避免了第一链cDNA合成过程中RNA/DNA杂交体中RNA被降解，具有高效的逆转录活性，适合合成长达9 k的cDNA片段。

产品特点：优化配制了用于第一链cDNA合成反应的各种成分，试剂盒中的Tonescript M-MLV具有高效的逆转录活性，避免了第一链cDNA合成过程中RNA/DNA杂交体中RNA被降解，具有高效的逆转录活性。适合后续的PCR、定量PCR以及PCR克隆，适用于各种PCR耐热聚合酶。

应用举例：反转录性

常见问题解析：

1、 没有RT-PCR产物或产量低

◆RNA模板降解。RNA 的纯度和完整对于反转录得到全长cDNA是非常重要的。提取的RNA应进行电泳检测以确定其是否降解。同时RNA要避免多次反复冻融。

◆RNA模板纯度低。提取RNA的过程中，可能残留一些盐离子、试剂，如 EDTA、酚、胍盐、磷酸盐、多胺等抑制接下来的反转录反应。建议用75%乙醇（DEPC 水配制）仔细清洗RNA沉淀。

◆引物不合适。选择合适的引物，当RNA是细菌RNA或者是没有polyA尾的RNA要选择随机引物或者特异引物。

◆目的基因含有复杂二级结构或高GC含量。建议选择随机引物进行反转录。将反转录温度提高至55℃。

2、RT-PCR 产物比预期长

◆RNA 中很可能污染了DNA。真核生物基因组DNA中含有内含子，可能参与了 PCR扩增，可以在反转录之前对RNA进行DNaseI的消化。

3、阴性对照中有RT-PCR产物

◆阴性对照中有RT-PCR产物也表明有DNA的污染。在反转录之前对RNA进行DNase I 的消化。